RNA Faigofie Vave Tissue / Pusa sela

A-1 Cell lysis poʻo le homogenization le lava

---- Faʻaititia faʻataʻitaʻiga faʻaaogaina, faʻateleina le aofaʻi o lysis buffer, faʻateleina homogenization ma lysis taimi.

A-2 Sample aofaiga e telē tele

---- Faʻaititia le aofaʻi o faʻataʻitaʻiga faʻaaogaina pe faʻateleina le aofaʻi o lysis buffer.

A-1 Le lava le sela lysis poʻo le homogenization

---- Faʻaititia faʻataʻitaʻiga faʻaaogaina, faʻateleina le aofaʻi o lysis buffer, faʻateleina homogenization ma lysis taimi.

A-2 Sample aofaiga e telē tele

---- Faʻamolemole vaʻai i le maualuga gafatia gafatia.

A-3 RNA e le elied atoa mai le koluma

---- A maeʻa ona faʻaopopo le RNase-Free vai, tuʻu mo ni nai minute ae le i totogia le centrifuging.

A-4 Ethanol i le eluent

---- A maeʻa le mulumulu, toe faʻatulaga lelei ma aveese le faʻamago i le mea sili e mafai.

A-5 Cell aganuu auala e le maeʻa uma

---- Pe a faʻaputuputuina sela, faʻamolemole ia mautinoa ia aveʻese le aganuʻu auala i le tele e mafai ai.

A-6 O sela o loʻo teuina ile RNAstore e leʻo totogia lelei

---- RNAstore density e sili atu nai lo le averesi sela aganuu auala; o lea e tatau ona faʻateleina le centrifugal force. E fautuaina e centrifuge ile 3000x g.

A-7 Low RNA mea ma tele i le faʻataʻitaʻiga

---- Faʻaaoga se faʻataʻitaʻiga lelei e faʻamautinoa ai pe o le maualalo o fua e mafua mai i le faʻataʻitaʻiga.

A-1 O mea e le fou

---- O mea fou e tatau ona teuina i totonu o le vai nitrogen i le taimi lava lena poʻo le vave tuʻuina i totonu o le RNAstore reagent e mautinoa ai le aveʻeseina aʻafiaga.

A-2 Sample aofaiga e telē tele

---- Faʻaititia le aofaʻi aofaʻi.

A-3 RNase faʻaleagainan

---- E ui lava e leʻo iai le RNase i le buffer o loʻo i totonu o le pusa, e faigofie lava ona faʻaleagaina le RNase i le taimi e aveese ai ma e tatau ona faʻatautaia ma le faʻaeteete.

A-4 Faʻaleagaina eletise

---- Sui le paipa eletise ma ia mautinoa o mea faʻaaoga ma Uta Faʻafefe e leai se faʻamaʻi RNase.

A-5 Tele tele utaina mo electrophoresis

---- Faʻaitiitia le aofaʻi o faʻataʻitaʻiga utaina, o le utaina o vaiʻeli uma e le tatau ona sili atu i le 2 μg.

A-1 Faʻataʻitaʻiga aofaʻi e telē tele

---- Faʻaititia le aofaʻi aofaʻi.

A-2 Nisi faʻataʻitaʻiga e maualuga aano o DNA ma e mafai ona togafitia ile DNase.

---- Faia togafitiga RNase-Free DNase ile tali RNA na maua, ma e mafai ona faʻaaoga saʻo le RNA mo suʻesuʻega mulimuli ane pe a maeʻa togafitiga, pe mafai foi ona faʻamamaina e RNA faʻamamaina ato.

Mo tioata, tao i le 150 ° C mo le 4 h. Mo palasitika koneteina, faʻatofu i le 0.5 M NaOH mo le 10 min, ona fufulu faʻamaeʻa lea i le RNase-leai se vai ona faʻamamaina lea e aveʻese atoa le RNase. O le reagents poʻo vaifofo faʻaogaina i le faʻataʻitaʻiga, aemaise lava le vai, tatau ona saoloto mai RNase. Faʻaaoga le vai e leai se RNase mo sauniuniga uma (faʻaopopo vai i se fagu tioata mama, faʻaopopo le DEPC i le faʻaiʻuga mulimuli o le 0.1% (V / V), lulu le po ma le autoclave).