Pipi Faʻasalaga Pusa PCR Faʻatonu

Faʻateleina le faʻatupulaia o le fua faʻatulagaina tuʻusaʻo mai meaola aano o manu e aunoa ma se aveʻesea mai i fafo.

O le Mouse Tissue Direct PCR Kit o loʻo faʻaaogaina se mamanu teuina tulaga ese e aofia ai ma meaola uma mo le vave saunia o le genomic DNA ma le PCR faʻateleina. E talafeagai mo le tasi-sitepu genome DNA faʻamamaina mai isumu maso (siʻusiʻu, taliga ma tamatamaivae) ma le mulimuli ane PCR faʻateleina ma mauaina. O le gaioiga atoa e le aofia ai le homogenization, talepeina, le faʻaluina o le po, aveeseina o le soli o meaola, faʻasusu o le etanol poʻo laʻasaga o le faʻamamaina o koluma. E mafai ona maua faʻaiʻuga tumau i faʻagaioiga faigofie ma vave.

O le 2 × Dir PCR MasterMix saunia e lenei pusa o se sili talafeagai PCR reagent e mafai lelei ma faʻapitoa faʻalauteleina DNA e aunoa ma le manaʻoga mo le aveʻesea o mea leaga e pei o polotini. Lenei agavaʻa aofia ai se vailaʻau suia suiga vevela-amataTaq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, buffers, faʻapea foi ma le mea e faʻamalosia ai, faʻamautinoa ma faʻamautuina mo tali a le PCR. O le PCR tali atu e mafai ona faia i le na o le faʻaopopoina i se auala lata mai maua mai template ma faʻapitoa primers. O le gaioiga atoa e vave, faigofie, maaleale, maoti ma mautu, lea e matua talafeagai mo le maualuga-throughput suʻesuʻega. O le 2 × Dir PCR MasterMix o loʻo iai le premix electrophoresis vali, ina ia mafai ai ona lafo saʻo atu oloa a le PCR mo le mauaina o le eletise pe a maeʻa le tali atu. O le 3 'iʻuga o le PCR oloa o loʻo i ai le A-tailing, lea e mafai ona faʻaaogaina mo TA faʻaleoleo.

Pusi leai Tele teuina
4992531 20 µl × 50 rxn
4992532 20 µl × 200 rxn

Oloa Faʻamatalaga

Galue

Faʻataʻitaʻiga Faʻataʻitaʻiga

FAQ

Pine o oloa

Features

■ Faigofie ma vave: Genomic DNA mafai ona vave aveʻesea mai isumu maso i le 60 minute e aunoa ma suavai nitrogen olo ma faʻamavae solvent.
■ Lautele faʻaoga: E talafeagai mo le tasi-sitepu aveʻese mai genomic DNA mai isumu isumu, taliga, tamatamaivae ma isi sela.
■ Maualuga faʻapitoa: O le Taq polymerase o loʻo faʻaaogaina i lenei oloa o se vailaʻau e suia ai le vevela, amata ai le maualuga o le tino ma le faʻateleina o le tino, lea e talafeagai lelei mo le genotyping ma le transgenic faʻailoga.
■ Gene mauaina: O le oloa e faigofie ona faʻagaioia ma faʻatuatuaina iʻuga, ma e sili ona talafeagai mo maualuga-throughput auiliiliga ma mauaina o isumu maso

Uma oloa mafai ona faʻapitoa mo ODM / OEM. Mo auiliiliga,faʻamolemole kiliki Customized Service (ODM / OEM)


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    Workflow

    Experimental Example

    Faʻaaogaina o le Mouse Tissue Direct PCR Kit ma oloa talafeagai mai le sapalai A e faʻateleina ai le 1000 bp, 2000 bp ma le 3000 bp fasi mai isumu isumu, isumu taliga ma isumu isumu. O le iʻuga na faʻaalia ai o le Mouse Tissue Direct PCR Kit e sili atu lona faʻapitoa ma le tulaga manuia.

    Q: Leai ni faʻamau faʻateleina

    A-1 Faʻataʻitaʻiga

    ■ O le faʻataʻitaʻiga o loʻo i ai ni polotini polotito poʻo Taq inhibitors, ma isi.

    ■ E le o maeʻa le faʻavaeina o faʻataʻitaʻiga - - Faʻalelei talafeagai le vevela o le sauniga ma faʻafualoa le taimi o le faʻasologa.

    ■ Faʻalumaina o le faʻataʻitaʻiga —— Toe sauni le faʻataʻitaʻiga.

    A-2 Faʻatomuaga

    ■ Le lelei le lelei o faʻamuamua ——Re toe faʻafouina le amataga.

    ■ Faʻaleagaina muamua --— Faʻavae muamua le maualuga o le faʻasusu i tamaʻi tusi mo le faʻasaoina. Aloese mai le tele o le malulu ma le liusuavai poʻo le umi taimi 4 ° C cryopreserve.

    ■ Le fetaui lelei le faʻavaeina o primers (eg primer length e le lava, dimer fausia i le va o primers, ma isi) -Redesign primers (aloese mai le fausiaina o primer dimer ma tulaga lua fausaga)

    A-3 Mg2+taulaʻi

    ■ Mg2+ ua maualalo tele le faʻatatau --— Faʻalelei lelei Mg2+ faʻamalosia: Faʻalelei le Mg2+ faʻamalosia e se faʻasologa o tali mai 1 mM i le 3 mM ma le va o le 0.5 mM e fuafua ai le sili lelei Mg2+ faʻasologa mo taʻitasi template ma primer.

    A-4 Annealing vevela

    ■ O le maualuga annealing vevela aafia ai le fusia o primer ma template. —— Faʻaitiitia le vevela faʻapipiʻi ma faʻalelei le tulaga i le gradient o le 2 ° C.

    A-5 Faʻasologa o taimi

    ■ Taimi faʻaopoopo puupuu —— Faʻateleina taimi faʻaopopo.

    Q: Sese mea lelei

    Phenomena: O faʻataʻitaʻiga le lelei e faʻaalia ai foʻi faʻasologa o faʻasologa.

    A-1 Faʻaleagaina o PCR

    ■ Faʻalavaveina faʻaleagaina o faʻasologa faʻasologa poʻo le faʻateleina o oloa --— Faʻaeteete aua neʻi pipuina le faʻataʻitaʻiga o loʻo i ai le faʻasologa faʻatulagaina i le le lelei faʻataʻitaʻiga pe faʻamaligiina i fafo mai le centrifuge tube. O reagents poʻo mea faigaluega e tatau ona autoclaved e aveʻese ai nei nucleic acid, ma le i ai o faʻaleagaina tatau ona fuafuaina e ala i le le lelei faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga.

    ■ Faʻaleagaina faʻaleagaina ——Faʻamaʻaina meaʻai ma faleoloa i le maualalo o le vevela.

    A-2 Palemiar

    ■ Mg2+ ua maualalo tele le faʻatatau --— Faʻalelei lelei Mg2+ faʻamalosia: Faʻalelei le Mg2+ faʻamalosia e se faʻasologa o tali mai 1 mM i le 3 mM ma le va o le 0.5 mM e fuafua ai le sili lelei Mg2+ faʻasologa mo taʻitasi template ma primer.

    ■ Le fetaui lelei le ata muamua, ma le faʻasologa faʻatulagaina ei ai homology ma le lē faʻatulagaina faʻasologa. ——Re-design primers.

    Q: Le faʻapitoa faʻalauteleina

    Phenomena: O faʻamau faʻalauteleina PCR e le ogatusa ma le tele fuafuaina, a le o le tele poʻo le laʻititi, poʻo nisi taimi uma faʻapitoa faʻalauteleina fusi ma le faʻapitoa faʻalauteleina fusi tupu.

    A-1 Faʻatomuaga

    ■ Lelei faʻatulagaina primer

    ——Re-design primer.

    ■ O le faʻamuamua primer e maualuga tele —— Faʻalelei lelei le denaturation vevela ma faʻafualoa taimi denaturation.

    A-2 Mg2+ taulaʻi

    ■ O le Mg2+ ua maualuga tele le faʻatonuina - - Faʻaitiitia lelei le faʻateteleina o le Mg2 +: Faʻaaoga lelei le Mg2+ faʻamalosia e se faʻasologa o tali mai 1 mM i le 3 mM ma le va o le 0.5 mM e fuafua ai le sili lelei Mg2+ faʻasologa mo taʻitasi template ma primer.

    A-3 Thermalable polymerase

    ■ Ova aofaʻi o le enzyme —— Faʻaitiitia talafeagai le aofaʻi o le enzyme i vaitaimi o le 0.5 U

    A-4 Annealing vevela

    ■ O le vevela faʻapipiʻi e maualalo tele —— Faʻalelei talafeagai le faʻapipiʻiina o le vevela pe faʻaogaina le lua-tulaga faʻamamaina auala

    A-5 PCR taʻamilosaga

    ■ Ova tele taʻamilosaga PCR —— Faʻaitiitia le aofaʻi o taʻavale PCR.

    Q: Patchy pe faʻapipiʻi fusi

    A-1 Faʻatomuaga——E le lelei le faʻamatalaina --- Le toe mamanuina o le tusi muamua, suia le tulaga ma le umi o le tusi muamua e faʻaleleia atili ai lona faʻapitoa; pe faʻataʻitaʻi PCR faʻamoe.

    A-2 Faʻataʻitaʻiga DNA

    ——E le mamā le faʻataʻitaʻiga --— Faʻamama le ata pe aveese DNA ma ato faʻamama.

    A-3 Mg2+ taulaʻi

    ——Mai2+ ua maualuga tele le faʻatonuina - - Faʻaitiitia tatau le Mg2+ faʻamalosia: Faʻalelei le Mg2+ faʻamalosia e se faʻasologa o tali mai 1 mM i le 3 mM ma le va o le 0.5 mM e fuafua ai le sili lelei Mg2+ faʻasologa mo taʻitasi template ma primer.

    A-4 dNTP

    —— O le faʻatulagaina o dNTPs e maualuga tele —— Faʻaitiitia talafeagai o le dNTP

    A-5 Annealing vevela

    ——Talu maualalo tele le vevela faʻapipiʻi —— Faʻatuputeleina le vevela faʻapipiʻi

    A-6 Taamilosaga

    —— Matua tele taʻamilosaga —— Faʻamamafa le numera ole taʻamilosaga

    Q: E fia faʻailoga DNA e tatau ona faʻaopopoina i le 50 μl PCR tali atu faʻasologa?
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    F: Faʻafefea ona faʻalautele umi fasi?

    O le laʻasaga muamua o le filifili lea o le polymerase talafeagai. Ole Taq polymerase masani e le mafai ona faʻamaonia ona o le le lava o le 3'-5 'exonuclease gaoioiga, ma le le fetaui lelei o le a matua faʻaititia ai le faʻalauteleina o le aoga o vaega. O le mea lea, o le Taq polymerase masani e le mafai ona faʻamalosia lelei vaega faʻatulagaina lapoʻa nai lo le 5 kb. Taq polymerase ma faʻapitoa suiga poʻo isi maualuga aiai ai polymerase tatau ona filifilia e faʻaleleia atili faʻalautelega lelei ma faʻamalieina ai manaʻoga o le umi fragment amplification. I se faʻaopopoga, o le faʻalauteleina o uumi vaega e manaʻomia foʻi fetuʻunaʻiga o uluaʻi mamanu, denaturation taimi, faʻaopoopoga taimi, buffer pH, ma isi masani, primers ma 18-24 bp mafai ona taʻitaʻia ai i sili lelei fua. Ina ia mafai ona puipuia le faʻaleagaina o le faʻavasega, o le taimi o le tino i le 94 ° C e tatau ona faʻaititia i le 30 sekone pe itiiti ifo i le taʻamilosaga, ma le taimi e faʻatupu ai le vevela i le 94 ° C ao le i faʻateleina le tatau ona laʻititi ifo i le 1 min. E le gata i lea, o le faʻatulagaina o le faʻalauteleina o le vevela pe a ma le 68 ° C ma le fuafuaina o le faʻaopoopoga taimi e tusa ai ma le fua faatatau o le 1 kb / min mafai ona mautinoa le faʻalauteleina aoga o umi fasi.

    Q: Faʻafefea ona faʻaleleia le faʻateleina o le faʻamaoni o le PCR?

    O le sese fua o le PCR faʻateleina mafai ona faʻaititia i le faʻaaogaina o DNA eseese polymerases ma maualuga faʻamaoni. Faʻatasi ai ma Taq DNA polymerases o loʻo maua i le taimi nei, o le Pfu enzyme o loʻo i ai le tau maualalo maualalo ma le maualuga o le faʻamaoni. I le faʻaopopoga i le filifiliga o le enzyme, e mafai e tagata suʻesuʻe ona faʻaititia le suiga o le PCR i le faʻamautinoaina o tulaga o tali atu, e aofia ai le faʻamautinoaina o le faʻapipiʻiina o le buffer, o le totoʻa o le polymerase ma le faʻamautinoaina o le numera o le taʻamilosaga a le PCR.

    Tusi lau feʻau ii ma lafo mai ia matou