2 × Taq Platinum PCR Faʻafefiloi

Ultra-pure HotStart maualuga-faʻamaoni thermostable DNA polymerase.

Taq Platinum DNA Polymerase o se vailaʻau-toe fesuiaʻi HotStart Taq polymerase ma le 3'-5 "exonuclease gaioiga ma le 5'-3" exonuclease gaioiga. O le gaioiga o gaioiga o Taq Platinum DNA Polymerase ua poloka i le vevela o le potu. O lana gaioiga faʻatoa mafai ona faʻagaoioia pe a maeʻa le vevela i le 94 ° C mo le 5-10 min, faʻapea ona aloese mai le le faʻapitoa faʻalauteleina mafua mai i primer le faʻapitoa faapipiiina poʻo primer dimer i le maualalo vevela i luma o le amataga taʻamilosaga o PCR tali atu, ma matua faʻaleleia le lagona malamalama ma le faʻapitoa o le PCR tali atu. I se faʻaopopoga, Taq Platinum DNA Polymerase e matua maualuga lona faʻamaoni, o le lona lua sili ona lelei i le Pfu polymerase. O le faʻaopoopoga o le saoasaoa o le DNA polymerization e vave nai lo le Pfu polymerase ma o le faʻamalosia lelei e sili atu.

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Oloa Faʻamatalaga

Faʻataʻitaʻiga Faʻataʻitaʻiga

FAQ

Pine o oloa

Uiga o uiga

1 iunite (U) Taq Platinum DNA Polymerase gaioiga o loʻo faʻamatalaina o le aofaʻi o le enzyme manaʻomia e tuʻufaʻatasia 10 nmol deoxynucleotides i acid-insoluble vailaʻau i le 74 ° C i totonu o le 30 minute faʻaaogaina faʻatagaina salmon sperm DNA o template / primer.

Pulea lelei

Le mama aʻiaʻi e SDS-PAGE mauaina e sili atu nai lo le 99%; Leai se gaioiga ole exogenous nuclease e faʻailoaina; Tasi-kopi kenera i tagata genome mafai faʻamalosia lelei; Leai se taua gaioiga suia pe a teu i le potu vevela mo le tasi le vaiaso.

Le faataamilosaga autu Autu

E i ai le 5'-3 "exonuclease gaioiga ma le 3'-5" exonuclease gaioiga, ma lona faʻamaoni e sosoʻo ma Pfu polymerase. O le faʻaopoopoga o le saoasaoa o le Taq Platinum Polymerase e sili atu le vave nai lo le Pfu polymerase ma o le faʻamalosia lelei e sili atu. E mafai ona faʻapipiʻi tuʻusaʻo PCR oloa i le iʻuga pupula pe faʻapipiʻiina i le TA vector. A faʻapea e manaʻomia le faʻaleleia o le lelei o le faʻamaumauga, e fautuaina ia faʻamama muamua ma faʻaopopo le 3'-dA overhangs ae leʻi faʻapipiʻiina i totonu le TA vector.

Tasi paipa Taq Platinum MasterMix (National High-Tech Oloa Tusi Faʻamaonia)

■ O le Taq Platinum MasterMix ua faʻaleleia atili le auiliiliina ma le maaleale o tali a le PCR ma mafai ai ona faʻateleina faʻataʻitaʻiga faigata ma le maualuga GC mataupu, tulaga lua faʻavae ma isi. A maualalo o le 2 kopi o le faʻataʻitaʻiga template mafai ona faʻateleina, mautinoa sili atu saʻo faʻaiuga faʻaiuga.

■ O le tulaga ese Taq Platinum MasterMix metotia faia ai le atoa tali atu tulaga mautu, ma le gaioiga o le a le afaina i le toe faʻamamaina-liu po o le umi teuina i le 4 ° C.

■ O le mautu ma lelei sauniuniga PCR fefiloi fofo mafai ona faia le faʻagaioiga vave ma faigofie, matua faʻaititia le galue malosi ma faʻataʻitaʻi sese. Maualuga-faʻamalosia PCR enhancer ma optimizer o loʻo aofia foi i totonu o le palu, lea e faʻaititia ai manaʻoga i PCR tuutuuga.

■ O lenei oloa e i ai uma vali-aofia ai ma vali-saoloto faiga. O vali-o loʻo i ai MasterMix oloa mafai ona tuusao electrophoresed ina ua maeʻa PCR, aunoa ma le faʻaopopoina utaina buffer.

Talosaga

E mafai ona suia le Pfu polymerase e faʻalauteleina ai le maualuga o le faʻamaoni oloa mai laʻasaga faigata e pei o genome, ma e talafeagai mo talosaga e pei o le faʻavasegaina o faʻaaliga genes, nofoaga-faʻapitoa suia ma auiliiliina o le tasi nucleotide polymorphism (SNP), ma isi.

Lapataiga i le Tusiaina o PCR Primers:

O le umi muamua e masani ona 20-25 mer. Ae peitaʻi, a faʻatinoina umi le fasi PCR, e tatau ona faʻateleina le umi umi ile 30-35 mer.

■ E leai se paga felagolagomaʻi i le va o le lua primers, aemaise lava mo le mulimuli 3 nofoaga autu i le 3 'faaiuga.

■ O mea e maua i le GC e tatau ona 50-60%, ma 'aloʻese mai le mauoa a le GC poʻo le AT. Ina ia mafai ona faia primer ma faʻataʻitaʻiga fusifusia stably, aloese AT oa mauoa i le 3 'faaiuga.

■ Aloese mai le primer e fausia ai tulaga lua.

■ Filifili lua primers ma Tm vevela latalata i le tasi.

Fuafuaina o Tm Taua o Aʻoga mo PCR:

■ A o le primer e laʻititi ifo i le 20 mer: Tm = 2 ° C × (A + T) + 4 ° C × (G + C).

■ A o le primer e sili atu nai lo 20 mer: Tm = 81.5 + 0.41 × (GC%) - 600 / L, o le L o le umi o le primer.

■ Seti le vevela faʻamau i le (Tm-5) ° C.

PCR Primer Input

O le talafeagai faʻasologa mulimuli o primers mafai ona filifilia i le va o 0.1 μM ma 1.0 μM. O le maualalo o le primer concentrations e mafua ai le maualalo o fua o le faʻateleina o oloa, ae o le maualuga tele o le primer concentration e sili atu ona faigofie i le le faʻapitoa amplification. E masani lava, a o le aofaʻi o template DNA e lapoʻa pe laʻititi template template DNA (e pei o le genome DNA o tagata) o loʻo faʻaaogaina o se template, o le primer concentrations e tatau ona maualalo. A o le aofaʻi o template DNA e laʻititi pe faigofie template template DNA (eg, plasmid DNA, ma isi) faʻaaogaina o se faʻataʻitaʻiga, e tatau ona maualuga le faʻatumuina muamua.

Uma oloa mafai ona faʻapitoa mo ODM / OEM. Mo auiliiliga,faʻamolemole kiliki Customized Service (ODM / OEM)


  • Talu ai:
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    Experimental ExampleExperimental Example Faʻaoga le genomic DNA e fai ma faʻataʻitaʻiga e faʻatele ai le 1 kb vaega.
    Q: Leai ni faʻamau faʻateleina

    A-1 Faʻataʻitaʻiga

    ■ O le faʻataʻitaʻiga o loʻo i ai ni polotini polotito poʻo Taq inhibitors, ma isi.

    ■ E le o maeʻa le faʻavaeina o faʻataʻitaʻiga - - Faʻalelei talafeagai le vevela o le sauniga ma faʻafualoa le taimi o le faʻasologa.

    ■ Faʻalumaina o le faʻataʻitaʻiga —— Toe sauni le faʻataʻitaʻiga.

    A-2 Faʻatomuaga

    ■ Le lelei le lelei o faʻamuamua ——Re toe faʻafouina le amataga.

    ■ Faʻaleagaina muamua --— Faʻavae muamua le maualuga o le faʻasusu i tamaʻi tusi mo le faʻasaoina. Aloese mai le tele o le malulu ma le liusuavai poʻo le umi taimi 4 ° C cryopreserve.

    ■ Le fetaui lelei le faʻavaeina o primers (eg primer length e le lava, dimer fausia i le va o primers, ma isi) -Redesign primers (aloese mai le fausiaina o primer dimer ma tulaga lua fausaga)

    A-3 Mg2+taulaʻi

    ■ Mg2+ ua maualalo tele le faʻatatau --— Faʻalelei lelei Mg2+ faʻamalosia: Faʻalelei le Mg2+ faʻamalosia e se faʻasologa o tali mai 1 mM i le 3 mM ma le va o le 0.5 mM e fuafua ai le sili lelei Mg2+ faʻasologa mo taʻitasi template ma primer.

    A-4 Annealing vevela

    ■ O le maualuga annealing vevela aafia ai le fusia o primer ma template. —— Faʻaitiitia le vevela faʻapipiʻi ma faʻalelei le tulaga i le gradient o le 2 ° C.

    A-5 Faʻasologa o taimi

    ■ Taimi faʻaopoopo puupuu —— Faʻateleina taimi faʻaopopo.

    Q: Sese mea lelei

    Phenomena: O faʻataʻitaʻiga le lelei e faʻaalia ai foʻi faʻasologa o faʻasologa.

    A-1 Faʻaleagaina o PCR

    ■ Faʻalavaveina faʻaleagaina o faʻasologa faʻasologa poʻo le faʻateleina o oloa --— Faʻaeteete aua neʻi pipuina le faʻataʻitaʻiga o loʻo i ai le faʻasologa faʻatulagaina i le le lelei faʻataʻitaʻiga pe faʻamaligiina i fafo mai le centrifuge tube. O reagents poʻo mea faigaluega e tatau ona autoclaved e aveʻese ai nei nucleic acid, ma le i ai o faʻaleagaina tatau ona fuafuaina e ala i le le lelei faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga.

    ■ Faʻaleagaina faʻaleagaina ——Faʻamaʻaina meaʻai ma faleoloa i le maualalo o le vevela.

    A-2 Palemiar

    ■ Mg2+ ua maualalo tele le faʻatatau --— Faʻalelei lelei Mg2+ faʻamalosia: Faʻalelei le Mg2+ faʻamalosia e se faʻasologa o tali mai 1 mM i le 3 mM ma le va o le 0.5 mM e fuafua ai le sili lelei Mg2+ faʻasologa mo taʻitasi template ma primer.

    ■ Le fetaui lelei le ata muamua, ma le faʻasologa faʻatulagaina ei ai homology ma le lē faʻatulagaina faʻasologa. ——Re-design primers.

    Q: Le faʻapitoa faʻalauteleina

    Phenomena: O faʻamau faʻalauteleina PCR e le ogatusa ma le tele fuafuaina, a le o le tele poʻo le laʻititi, poʻo nisi taimi uma faʻapitoa faʻalauteleina fusi ma le faʻapitoa faʻalauteleina fusi tupu.

    A-1 Faʻatomuaga

    ■ Lelei faʻatulagaina primer

    ——Re-design primer.

    ■ O le faʻamuamua primer e maualuga tele —— Faʻalelei lelei le denaturation vevela ma faʻafualoa taimi denaturation.

    A-2 Mg2+ taulaʻi

    ■ O le Mg2+ ua maualuga tele le faʻatonuina - - Faʻaitiitia lelei le faʻateteleina o le Mg2 +: Faʻaaoga lelei le Mg2+ faʻamalosia e se faʻasologa o tali mai 1 mM i le 3 mM ma le va o le 0.5 mM e fuafua ai le sili lelei Mg2+ faʻasologa mo taʻitasi template ma primer.

    A-3 Thermalable polymerase

    ■ Ova aofaʻi o le enzyme —— Faʻaitiitia talafeagai le aofaʻi o le enzyme i vaitaimi o le 0.5 U

    A-4 Annealing vevela

    ■ O le vevela faʻapipiʻi e maualalo tele —— Faʻalelei talafeagai le faʻapipiʻiina o le vevela pe faʻaogaina le lua-tulaga faʻamamaina auala

    A-5 PCR taʻamilosaga

    ■ Ova tele taʻamilosaga PCR —— Faʻaitiitia le aofaʻi o taʻavale PCR.

    Q: Patchy pe faʻapipiʻi fusi

    A-1 Faʻatomuaga——E le lelei le faʻamatalaina --- Le toe mamanuina o le tusi muamua, suia le tulaga ma le umi o le tusi muamua e faʻaleleia atili ai lona faʻapitoa; pe faʻataʻitaʻi PCR faʻamoe.

    A-2 Faʻataʻitaʻiga DNA

    ——E le mamā le faʻataʻitaʻiga --— Faʻamama le ata pe aveese DNA ma ato faʻamama.

    A-3 Mg2+ taulaʻi

    ——Mai2+ ua maualuga tele le faʻatonuina - - Faʻaitiitia tatau le Mg2+ faʻamalosia: Faʻalelei le Mg2+ faʻamalosia e se faʻasologa o tali mai 1 mM i le 3 mM ma le va o le 0.5 mM e fuafua ai le sili lelei Mg2+ faʻasologa mo taʻitasi template ma primer.

    A-4 dNTP

    —— O le faʻatulagaina o dNTPs e maualuga tele —— Faʻaitiitia talafeagai o le dNTP

    A-5 Annealing vevela

    ——Talu maualalo tele le vevela faʻapipiʻi —— Faʻatuputeleina le vevela faʻapipiʻi

    A-6 Taamilosaga

    —— Matua tele taʻamilosaga —— Faʻamamafa le numera ole taʻamilosaga

    Q: E fia faʻailoga DNA e tatau ona faʻaopopoina i le 50 μl PCR tali atu faʻasologa?
    ytry
    F: Faʻafefea ona faʻalautele umi fasi?

    O le laʻasaga muamua o le filifili lea o le polymerase talafeagai. Ole Taq polymerase masani e le mafai ona faʻamaonia ona o le le lava o le 3'-5 'exonuclease gaoioiga, ma le le fetaui lelei o le a matua faʻaititia ai le faʻalauteleina o le aoga o vaega. O le mea lea, o le Taq polymerase masani e le mafai ona faʻamalosia lelei vaega faʻatulagaina lapoʻa nai lo le 5 kb. Taq polymerase ma faʻapitoa suiga poʻo isi maualuga aiai ai polymerase tatau ona filifilia e faʻaleleia atili faʻalautelega lelei ma faʻamalieina ai manaʻoga o le umi fragment amplification. I se faʻaopopoga, o le faʻalauteleina o uumi vaega e manaʻomia foʻi fetuʻunaʻiga o uluaʻi mamanu, denaturation taimi, faʻaopoopoga taimi, buffer pH, ma isi masani, primers ma 18-24 bp mafai ona taʻitaʻia ai i sili lelei fua. Ina ia mafai ona puipuia le faʻaleagaina o le faʻavasega, o le taimi o le tino i le 94 ° C e tatau ona faʻaititia i le 30 sekone pe itiiti ifo i le taʻamilosaga, ma le taimi e faʻatupu ai le vevela i le 94 ° C ao le i faʻateleina le tatau ona laʻititi ifo i le 1 min. E le gata i lea, o le faʻatulagaina o le faʻalauteleina o le vevela pe a ma le 68 ° C ma le fuafuaina o le faʻaopoopoga taimi e tusa ai ma le fua faatatau o le 1 kb / min mafai ona mautinoa le faʻalauteleina aoga o umi fasi.

    Q: Faʻafefea ona faʻaleleia le faʻateleina o le faʻamaoni o le PCR?

    O le sese fua o le PCR faʻateleina mafai ona faʻaititia i le faʻaaogaina o DNA eseese polymerases ma maualuga faʻamaoni. Faʻatasi ai ma Taq DNA polymerases o loʻo maua i le taimi nei, o le Pfu enzyme o loʻo i ai le tau maualalo maualalo ma le maualuga o le faʻamaoni. I le faʻaopopoga i le filifiliga o le enzyme, e mafai e tagata suʻesuʻe ona faʻaititia le suiga o le PCR i le faʻamautinoaina o tulaga o tali atu, e aofia ai le faʻamautinoaina o le faʻapipiʻiina o le buffer, o le totoʻa o le polymerase ma le faʻamautinoaina o le numera o le taʻamilosaga a le PCR.

    Tusi lau feʻau ii ma lafo mai ia matou